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分析原理
NewEast Biosciences Arl1激l活检测试剂盒基于配置特异性抗Arl1-GTP从细胞提取物或体外检测活性Arl1-GTP水平的单克l隆抗l体GTPγS负载Arl1活化分析。简而言之,抗活性Arl1小鼠单克l隆抗l体将用含有Arl1-GTP的细胞裂解液培养。然后,绑定的活动Arl1将被下拉蛋白质A/G琼脂糖。用抗Arl1兔多克l隆抗l体或抗Arl1小鼠单克l隆抗l体进行免l疫印迹分析,检测沉淀的活性Arl1。
需要但未提供的材料
1刺激性和非刺激性细胞裂解物
2蛋白酶抑制素
4°C摇管器或振动筛
40.5 M EDTA,pH8.0
51百万氯化镁
62X还原SDS-PAGE样品缓冲液
7电泳和免l疫印迹系统
8免l疫印迹洗涤缓冲液,如TBST(10 mM Tris HCl,Rac1 kit,pH 7.4,0.15 M NaCl,0.05%
吐温-20)
9免l疫印迹阻断缓冲液(含5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白的TBST)
10PVDF或硝化纤维膜
11次级抗l体
12ECL检测试剂
分析原理
基于构型特异性抗Gα13-GTP的NewEast生物科学Gα13活化检测试剂盒从细胞提取物或体外检测活性Gα13-GTP水平的单克l隆抗l体GTPγS负载Gα13活化试验。简单地说,抗活性Gα13小鼠单克l隆抗l体用含有Gα13-GTP的细胞裂解液培养。结合的活性Gα13将被蛋白质A/G琼脂糖。用兔抗α13多克l隆抗l体免l疫印迹法检测沉淀的活性Gα13。
储存条件
试剂盒的成分在试剂盒的有效期限内必须存放于4°C条件下保存。
试剂(试剂盒内不提供,由实验者自行配置)
1. 刺激和未刺激的细胞裂解物;
2. 蛋白酶抑制l剂;
3. 4 °C 摇杆或者摇床;
4. 0.5 M EDTA (pH 8.0);
5. 1 M MgCl2;
6. 2X reducing SDS-PAGE sample buffer;
7. 电泳和免l疫印迹相关试剂;
8. 免l疫印迹缓冲液TBST (10 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 M NaCl, 0.05%
Tween-20);
9. 免l疫印迹封闭缓冲液 (TBST containing 5% 脱脂奶粉 or 3% BSA);
10. PVDF或硝l酸纤维素膜;
11. 二抗;
12. ECL 检测试剂;
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