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当前没有直接测定法来测量Arl1 GTPases的激l活。
NewEast Biosciences Arl1激l活检测试剂盒基于特定于配置的单克l隆抗l体,该抗l体特异性识别Arl1-GTP,但不能识别Arl1-GDP。 鉴于单克l隆抗l体对其抗原的高度亲和力,可以在短时间内进行激l活测定。 该测定法可提供可靠的结果,并具有一致的可重复性。
阳性对照和阴性对照的体外GTPγS/ GDP蛋白质上样量
注意:体内细胞刺激将激l活可用Arf 6的大约10%,而体外GTPγS蛋白负载将激l活Arf 6的将近90%。
1,将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中(或使用1 μg纯化的Arf 6蛋白)。
2,向每个试管中加入20 μl 0.5 M EDTA(终浓度为20 mM)。
3,将5 μl 100 XGTPγS(至100 μM,终浓度)加到一个试管中(阳性对照)。
4,在第二个试管中加入5 μl 100 X GDP(至1 mM,终浓度)(阴性对照)。
5,在搅拌下将试管在30°C孵育30分钟。
6,通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2(至60 mM,终浓度)来停止加载。
产品描述
一系列结构多样的配体,从光子到大肽,激l活GPCRs来激发它们的生理功能。配体结合的GPCRs,反过来,起到鸟呤核苷酸交换的作用Gβγ存在下Gα亚基上的GDP与GTP交换的催化因子,Rac1 kit,导致Gα亚单位与Gβγ二聚体分离形成两个功能单元(Gα和Gβγ)。Gα和Gβγ亚单位都向各种细胞信号通路发出信号。根据顺序与功能同源,G蛋白分为四个家族:Gs,Gi、Gq和G12。增加这些G蛋白的效应器和相互作用蛋白的数量已经被鉴定,生理上G蛋白参与的过程正在增殖。
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