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测定步骤
I.主动Arf 6下拉分析
1.将0.5 – 1 mL细胞裂解液等分到微量离心管中。
2.使用1X分析/裂解缓冲液将每个样品的体积调整为1 mL。
3.在管中加入1 μl抗活性Arf 6单克l隆抗l体。
4.通过涡旋或滴定重悬蛋白A / G琼脂糖珠浆。
5.快速向每个管中添加20 μL重悬浮的珠浆。
6.轻轻搅拌将试管在4°C下孵育1小时。
7.通过以5，000 x g离心1分钟来沉淀小珠。
8.吸出并丢弃上清液，确保不要干扰/除去珠粒。
9.用0.5 mL的1X Assay / Lysis Buffer洗涤磁珠3次，每次离心并吸出。
10.后一次洗涤后，将珠粒沉淀并小心除去所有上清液。
11.将磁珠沉淀重悬于20 μL 2X还原SDS-PAGE样品缓冲液中。
12.将每个样品煮沸5分钟。
13.以5，000 x g的速度离心每个样品10秒钟。
1.刺激的和非刺激的细胞裂解液
2.蛋白酶抑l制剂
3. 4°C管摇杆或摇床
4. 0.5 M EDTA，pH8.0
5. 1 M氯化镁
6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液
7.电泳和免l疫印迹系统
8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如TBST（10 mM Tris-HCl，Rap1 kit，pH 7.4，0.15 M NaCl，0.05％
吐温20）
9.免l疫印迹封闭缓冲液（TBST包含5％脱脂奶粉或3％BSA）
10. PVDF或硝l酸纤维素膜
11.二抗
12. ECL检测试剂
基因符号：RAB11
说明：抗活性Rab11小鼠单克l隆抗l体
背景：Rab系列的小GTP酶是控制膜运输的机械的关键要素。 Rab11已显示可控制通过回收内体的运输。
免l疫原：活性Rab11的重组全长蛋白
应用范围：IP，IHC
推荐的稀释液：IP：1μg，用于1?2 mg总细胞蛋白
IHC：1：50?100稀释
浓度：1 mg / ml
格式：液体
同种型：IgG2b
纯度：从腹l水中纯化
存储缓冲区：
防腐剂：否
成分：PBS（不含Mg2 +和Ca2 +），pH 7.4、150 mM NaCl，50％甘油
种属反应性：抗活性Rab11抗l体识别来自脊椎动物的活性Rab11。
储存条件：储存于-20°C。 避免冻结/解冻周期
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