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Arf样蛋白1（Arl1）是GTpases的Ras超家族中的调控性GTPases Arf家族的成员，并且在整个真核生物中都具有高度保守的直系同源基因。 Arl1对果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育至关重要。 Arl1在主要序列，细胞定位和功能（膜运输调节）上与Arf1-6较相似，甚至共享几个共同的结合伴侣。 除了其在高尔基体/反式高尔基体网络中的膜运输功能中，还有报道表明Arl1在酵母中的离子稳态中可能发挥作用。
Arf6激l活测定。 经GDP（lane1）或GTPγS（lane 2）处理后，Active Rac，纯化的Arf6蛋白被免l疫沉淀。 用抗活性Arf6单克l隆抗l体进行免l疫沉淀。
1.抗活性Arf 6，小鼠单克l隆抗l体（货号26918）：一小瓶– 22 μL（1
含50％甘油和0.05％叠氮l化钠的PBS（pH 7.4）中的浓度（mg / ml）。 该抗l体特异性识别所有脊椎动物的Arf 6-GTP。
2.蛋白A / G琼脂糖（目录号30301）：一小瓶– 400 μL 50％浆液。
3. 5X测定/裂解缓冲液（目录号30302）：一瓶– 30 mL的250 mM Tris-HCl，pH 8，750mM NaCl，50 mM MgCl2，5 mM EDTA，5％Triton X-100。
4.抗Arf 6，兔多克l隆抗l体（货号21032）：一小瓶– 100 μL（1 mg / ml）
pH 7.4的PBS中含有50％的甘油。
5. 100 XGTPγS（目录号30303）：1瓶– 100 μl，10 mM，使用5 μLGTPγS标记0.5 mL细胞裂解液。
6. 100 X GDP（产品目录号30304）：一个样品瓶– 100 μl，100 mM，使用5 μL GDP标记0.5 mL细胞裂解物。
测定步骤
I.主动Arf 6下拉分析
1.将0.5 – 1 mL细胞裂解液等分到微量离心管中。
2.使用1X分析/裂解缓冲液将每个样品的体积调整为1 mL。
3.在管中加入1 μl抗活性Arf 6单克l隆抗l体。
4.通过涡旋或滴定重悬蛋白A / G琼脂糖珠浆。
5.快速向每个管中添加20 μL重悬浮的珠浆。
6.轻轻搅拌将试管在4°C下孵育1小时。
7.通过以5，000 x g离心1分钟来沉淀小珠。
8.吸出并丢弃上清液，确保不要干扰/除去珠粒。
9.用0.5 mL的1X Assay / Lysis Buffer洗涤磁珠3次，每次离心并吸出。
10.后一次洗涤后，将珠粒沉淀并小心除去所有上清液。
11.将磁珠沉淀重悬于20 μL 2X还原SDS-PAGE样品缓冲液中。
12.将每个样品煮沸5分钟。
13.以5，000 x g的速度离心每个样品10秒钟。
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