Rap1 kit-武汉纽斯特公司

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测定步骤

I.主动Arf 6下拉分析

1.将0.5 – 1 mL细胞裂解液等分到微量离心管中。

2.使用1X分析/裂解缓冲液将每个样品的体积调整为1 mL。

3.在管中加入1 μl抗活性Arf 6单克l隆抗l体。

4.通过涡旋或滴定重悬蛋白A / G琼脂糖珠浆。

5.快速向每个管中添加20 μL重悬浮的珠浆。

6.轻轻搅拌将试管在4°C下孵育1小时。

7.通过以5，000 x g离心1分钟来沉淀小珠。

8.吸出并丢弃上清液，确保不要干扰/除去珠粒。

9.用0.5 mL的1X Assay / Lysis Buffer洗涤磁珠3次，每次离心并吸出。

10.后一次洗涤后，将珠粒沉淀并小心除去所有上清液。

11.将磁珠沉淀重悬于20 μL 2X还原SDS-PAGE样品缓冲液中。

12.将每个样品煮沸5分钟。

13.以5，000 x g的速度离心每个样品10秒钟。

1.刺激的和非刺激的细胞裂解液

2.蛋白酶抑l制剂

3. 4°C管摇杆或摇床

4. 0.5 M EDTA，pH8.0

5. 1 M氯化镁

6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液

7.电泳和免l疫印迹系统

8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如TBST（10 mM Tris-HCl，Rap1 kit，pH 7.4，0.15 M NaCl，0.05％

吐温20）

9.免l疫印迹封闭缓冲液（TBST包含5％脱脂奶粉或3％BSA）

10. PVDF或硝l酸纤维素膜

11.二抗

12. ECL检测试剂

基因符号：RAB11

说明：抗活性Rab11小鼠单克l隆抗l体

背景：Rab系列的小GTP酶是控制膜运输的机械的关键要素。 Rab11已显示可控制通过回收内体的运输。

免l疫原：活性Rab11的重组全长蛋白

应用范围：IP，IHC

推荐的稀释液：IP：1μg，用于1?2 mg总细胞蛋白

IHC：1：50?100稀释

浓度：1 mg / ml

格式：液体

同种型：IgG2b

纯度：从腹l水中纯化

存储缓冲区：

防腐剂：否

成分：PBS（不含Mg2 +和Ca2 +），pH 7.4、150 mM NaCl，50％甘油

种属反应性：抗活性Rab11抗l体识别来自脊椎动物的活性Rab11。

储存条件：储存于-20°C。 避免冻结/解冻周期