Rac kit-武汉纽斯特生物(图)

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试剂准备

?1X测定/裂解缓冲液：短暂混合5X储备液，并在去离子水中稀释至1X。 在使用前，添加蛋白酶抑制l剂，例如1 mM PMSF，10 μg / mL亮肽素和10 μg / mL抑肽酶。

1.将细胞（一块10厘米长的平板，约107个细胞）培养至约80-90％汇合。根据需要用活化剂或抑制l剂刺激细胞。

2.吸出培养基，并用冰冷的PBS洗涤两次。

3.完全除去PBS洗涤液，然后向细胞中加入冰冷的1X分析/裂解缓冲液（每10 cm组织培养板0.5-1 mL）。

4.将培养板放在冰上10-20分钟。

5.用刮板将其从平板上取下。

6.将裂解物转移至适当大小的试管中，并置于冰上。

7.如果发生核裂解，则细胞裂解液可能变得非常粘稠，难以移液。如果发生这种情况，可将裂解液通过27?号注l射器针头3-4次以剪切基因组DNA。

8.通过离心10分钟（在4°C下为12，000 x g）清除裂解物。

9.收集上清液并将样品（约1-2 mg的总蛋白）存储在冰上以立即使用，或速冻并存储在-70°C以便将来使用。

小G蛋白是从属于细胞调节因子中的一个超家族。Rho家族是小G蛋白中的一个亚家族，它在细胞运动、细胞分裂以及基因转录中发挥主要作用。而本试剂盒中的Cdc42就属于Rho亚家族中的一种，Rac kit， Cdc42参与生理活动过程中其分子结构会呈现出2种相互转换的形式：与GTP结合的激l活状态和与GDP结合的非活性状态。

目前Cdc42蛋白活性的检测主要是依据小GTP酶Cdc42可以与p21活化激酶（PAK）的p21结合区域（PBD）结合，使PAK活化从而发挥生物学功能，进而间接的进行Cdc42活性l功能的监测。然而此方法在检测过程中存在着一定的局限性比如GTP水解成GDP的速度过快以及Cdc42-GTP结合蛋白与p21结合区域之间较低的亲和力，导致这种检测方法的重复性较差。

GTPases的Rab家族调节真核水泡膜运输。 Rab35与两个血浆

膜和内体定位，并涉及到包括T细胞受体回收，卵母细胞卵黄蛋白回收和胞质分裂在内的各种过程。 Rab35调节神经元样细胞中的神经突生长，并可以诱导突起。

当前没有直接测定法来测量Rab35 GTPases的活化。

NewEast Biosciences Rab35激l活检测试剂盒基于特定于配置的单克l隆

特异性识别Rab35 GTP而不识别Rab Rab35 GDP的抗l体。鉴于...的高度亲和力

抗原的单克l隆抗l体，可以在短时间内进行激l活测定。这个

分析提供了可靠的结果，并具有一致的可重复性。

这些抗Rab35 GTP单克l隆抗l体也可以用于监测大鼠Rab35的激l活。

1细胞和组织中的免l疫组织化学。

NewEast Biosciences Rab35激l活检测试剂盒提供了一种简单快速的方法来监测

Rab35的激l活。每个试剂盒均提供足够的量以执行20个测定。