Rac1 kit-武汉纽斯特公司

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体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照

注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的Cdc42被激l活，而在体外用GTPγS处理大约有90%的Cdc42被激l活。

1. 准备两个离心管，每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物（如果是纯的Cdc42蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。

2. 每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。

3. 一个管中加入5ul的100X GTPγS（终浓度即为100 uM）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP（终浓度即为1 mM）作为阴性对照。

4. 将离心管置于30°C条件下反应30min并不断搅动。

5. 终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。

基因符号：RAB11

说明：抗活性Rab11小鼠单克l隆抗l体

背景：Rab系列的小GTP酶是控制膜运输的机械的关键要素。 Rab11已显示可控制通过回收内体的运输。

免l疫原：活性Rab11的重组全长蛋白

应用范围：IP，IHC

推荐的稀释液：IP：1μg，用于1?2 mg总细胞蛋白

IHC：1：50?100稀释

浓度：1 mg / ml

格式：液体

同种型：IgG2b

纯度：从腹l水中纯化

存储缓冲区：

防腐剂：否

成分：PBS（不含Mg2 +和Ca2 +），pH 7.4、150 mM NaCl，50％甘油

种属反应性：抗活性Rab11抗l体识别来自脊椎动物的活性Rab11。

储存条件：储存于-20°C。 避免冻结/解冻周期

电泳和转移

1向聚丙l烯酰胺凝胶（17%）中加入15μL/孔的下拉上清液。而且建议包括预染色MW标准（作为成功转入的指标步骤3）。

2按照制造商的说明进行SDS-PAGE。

3按照制造商的说明，将凝胶蛋白转移到PVDF或硝化纤维膜上说明。

免l疫印迹检测（所有步骤均在室温下搅拌）

1在电印迹步骤之后，将PVDF膜浸入100%甲l醇中15次

然后在室温下干燥5分钟。

如果使用硝基纤维素，则应跳过此步骤。

2室温下用5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白在TBST中封闭1小时

不断地搅动。

用抗Arl1单克l隆抗l体孵育，新鲜稀释1:50~1000

（取决于样品中Arl1蛋白质的含量）5%脱脂奶粉或3%

BSA/TBST，室温下持续搅拌1-2小时或4o

过夜。

3用TBST清洗吸水膜三次，每次5分钟。

4用二级抗l体（例如山羊抗鼠IgG，HRP结合物）培养膜，Rac1 kit，

在室温下，在5%脱脂奶粉或3%BSA/TBST中新鲜稀释1:1000，1小时

不断地搅动。

5用TBST清洗吸水膜三次，每次5分钟。

6使用您选择的检测方法，如ECL。