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分析原理
NewEast Biosciences Arl1激l活检测试剂盒基于配置特异性抗Arl1-GTP从细胞提取物或体外检测活性Arl1-GTP水平的单克l隆抗l体GTPγS负载Arl1活化分析。简而言之，抗活性Arl1小鼠单克l隆抗l体将用含有Arl1-GTP的细胞裂解液培养。然后，绑定的活动Arl1将被下拉蛋白质A/G琼脂糖。用抗Arl1兔多克l隆抗l体或抗Arl1小鼠单克l隆抗l体进行免l疫印迹分析，检测沉淀的活性Arl1。
需要但未提供的材料
1刺激性和非刺激性细胞裂解物
2蛋白酶抑制素
4°C摇管器或振动筛
40.5 M EDTA，pH8.0
51百万氯化镁
62X还原SDS-PAGE样品缓冲液
7电泳和免l疫印迹系统
8免l疫印迹洗涤缓冲液，如TBST（10 mM Tris HCl，pH 7.4，0.15 M NaCl，Rac kit，0.05%
吐温-20）
9免l疫印迹阻断缓冲液（含5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白的TBST）
10PVDF或硝化纤维膜
11次级抗l体
12ECL检测试剂
Arl1激l活试验。纯化的GST标记的Arl1蛋白用抗活性Arl1单克l隆抗l体（Cat。#26924）用GDP（车道1）或GTPγS（车道2）处理后，用抗Arl1单克l隆抗l体（Cat）进行印迹。#26056年）。显示Arl1蛋白输入控制在底部面板中。
产品描述
Arf样蛋白1（Arl1）是调节性gtpase家族中的一员，位于Ras中GTPases的超家族，在真核生物中具有高度保守的同源基因。Arl1至关重要用于果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育。Arl1在一级序列，细胞位置和功能（膜交通的调节）到Arf1–6甚至共享几个共同的有约束力的合作伙伴。除了在膜交通中的作用高尔基/跨高尔基网络，有报道表明Arl1可能在离子稳态中起作用酵母。
目前还没有直接测定Arl1-gtpase活性的方法。NewEast Biosciences Arl1激l活检测试剂盒是基于特定构型的单克l隆抗l体特异性识别Arl1 GTP，但不识别Arl1 GDP的抗l体。鉴于单克l隆抗l体对其抗原，活化试验可在短时间内进行。这个分析结果可靠，重现性一致。
小G蛋白是从属于细胞调节因子中的一个超家族。Rho家族是小G蛋白中的一个亚家族，它在细胞运动、细胞分裂以及基因转录中发挥主要作用。而本试剂盒中的Cdc42就属于Rho亚家族中的一种， Cdc42参与生理活动过程中其分子结构会呈现出2种相互转换的形式：与GTP结合的激l活状态和与GDP结合的非活性状态。
目前Cdc42蛋白活性的检测主要是依据小GTP酶Cdc42可以与p21活化激酶（PAK）的p21结合区域（PBD）结合，使PAK活化从而发挥生物学功能，进而间接的进行Cdc42活性l功能的监测。然而此方法在检测过程中存在着一定的局限性比如GTP水解成GDP的速度过快以及Cdc42-GTP结合蛋白与p21结合区域之间较低的亲和力，导致这种检测方法的重复性较差。
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