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对于生长的组织培养液中的细胞,首先移除培养基,然后加入0.1M HCl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解;如果裂解不充分,接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心,收集上清直接用于实验。临用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%浓度的Triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内,去污剂并不干扰试验的结合部位,但是会适度的增加光密度值。含有Triton的样品需利用标准曲线估计浓度,为了较精l确的测定,标准曲线需以相同方式稀释。取1 mL细胞培养上清加入10μL浓盐酸,600g离心力于室温离心,人环磷酸腺苷 cAMP ELISA,上清液直接用于实验测定分析。
结果计算样品中cAMP浓度有多种计算方法。X轴表示cAMP标准品浓度,Y轴表示净光密度的平均值或者百分比值。
1 样品和标准品的净光密度(OD)平均值的计算:
净OD平均值 = OD平均值 - NSB孔OD平均值
2 计算不同梯度浓度标准品的结合率占较大结合率(B0孔)的百分比,计算公式 如下:
百分比值 = (净OD平均值/ B0孔OD平均值)×100
3 绘制净OD平均值或百分比值对cAMP标准品浓度的Logit-Log曲线。通过插值即可得到样品中cAMP浓度。
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酶标记抗l体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗l体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗l体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
武汉纽斯特生物(多图)-人环磷酸腺苷 cAMP ELISA由武汉纽斯特生物技术有限公司提供。“G蛋白活性,cAMP和cGMP ELISA试剂盒,蛋白点突变”选择武汉纽斯特生物技术有限公司,公司位于:湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物城B3-3栋3楼,多年来,武汉纽斯特坚持为客户提供好的服务,联系人:黄经理。欢迎广大新老客户来电,来函,亲临指导,洽谈业务。武汉纽斯特期待成为您的长期合作伙伴!