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试剂准备
1. 非乙酰化cAMP标准品
将5000 pmol/mL cAMP标准品溶液平衡至室温。从#1至#6标记六只洁净试管。移取475μL 0.1M HCl到#1号试管,400μL到#2至#6号试管。加入25μL 5000 pmol/mL cAMP标准品到#1管中,剧烈涡旋震荡。从#1管中取出100μL溶液至#2管中,涡旋震荡。以此类推,重复上步操作,梯度稀释至#6管。
经以上操作,#1至#6管中cAMP标准品浓度分别为250,50,10,2,0.4和0.08 pmol/mL(详见cAMP实验稀释详情键盘纸)。稀释过的标准品需在30分钟内使用。
标记一只试管作为无标准品空白对照(NSB)。移取600μL 0.1M HCl到NSB管中。
2. 洗涤液
将15 mL 10×洗涤液储液加到135 mL去离子水中,稀释成工作液。稀释液可在室温保存至试剂盒有效期限,或者3个月。
目前商业化提供的一些cAMP检测试剂盒主要应用ELISA的方案,使用的是非亲和纯化的cAMP多克l隆抗l体,尽管具有灵敏性,这些多克l隆抗l体与ATP存在一定程度的交叉反应。基于ATP是cAMP生产的底物,很有必要找到一种能高特异性识别cAMP的抗l体。纽斯特生物开发出了鼠单克l隆抗l体的cAMP ELISA 检测试剂盒。该单克l隆抗l体对cAMP的特异性比cAMP、ATP等类似的小分子高出108 倍以上。相较于其他的多克l隆抗l体cAMP试剂盒,纽斯特生物cAMP ELISA试剂盒能显著的提高其灵敏性和特异性,且能有效避免来自动物多克l隆抗l体的批次间差异, 因此可以提供长久有效地可重复性定量检测。
ELISA法是免l疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传l染病、寄生l虫病及非传l染病等方面的免l疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,cAMP antibody,因此,也适合于血l清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗l体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,
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